发文单位:卫生部

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发文单位:国家食物药监管理局

文  号:卫医发[2000]412号

张 鹏 (亚马逊河省珠江市动物卫生监督所 15捌仟)

文  号:国食药监注[2004]122号

宣告日期:2000-11-22

1 止痛和凝血机制

发表日期:2004-4-19

实行日期:2000-11-22

在生理状态下,血液中有微量纤维蛋白生成,并遮盖在血管内膜上,珍重血管内皮,以维持血管的常规通透性,同期生成的矮小蛋白又被微小蛋白溶酶所溶解,凝血与纤溶处于动态平衡状态,保持机体不出血,也无血栓产生,血液是流体状态而循环于全身。当这种平衡失调时,便可引致大出血不只有或变异血栓,即镇痉与凝血障碍。止、凝血障碍的机制拾叁分复杂,其涉嫌微血管、血小板、各凝血因子、抗凝因子及纤维蛋白溶解系统等多数成分。在健康时止、凝血系统与抗凝血和微小蛋白溶解系统处于动态平衡状态,遂能既无出血也无血栓产生。若止、凝血活性减少或抗凝血及纤溶活性加强则会引起低凝状态发生出血症状。相反会引起高凝状态或促成血栓产生。前面一个临床的上面统称为出血性疾病,前面一个统称为血栓性病痛。

执行日期:2004-4-19

生效日期:1900-1-1

2 凝血作用检查

生效日期:1900-1-1

外省、自治区、直辖市卫生厅(局),河北生产建设兵团卫生局:

凝血时间测定。静脉血放在玻璃试管中,观察自采血开端至血凝所需的时日称为凝血时间。该考试是反映自因子Ⅶ被负电荷表面激活,至纤维蛋白形成,一而再串的复杂酶反应所需的光阴,主要反映内源性凝血进程首前期有无差别常。在大手术或肝、脾穿刺前进展本项测定,能够赶紧开掘出血性素质病痛,防止大批量出血。凝血时间延长,血浆内其余一种凝血因子的短处,差十分少都可挑起凝血时间延长,见于凝血因子Ⅷ、Ⅸ、膳食纤维K缺少及伴有弥漫性血管内凝血的重剧病痛等。

各市、自治区、直辖市食物药监管理局(药监管理局):

  经专家论证并经作者部核实同意,现将《出、凝血时间检查方法操作规程》印发给您们,请布告各级各种诊治机构依照实施。同期对出、凝血时间验证方法建议如下须求:

出血时间测定。出血时间是指皮肤毛细血管经人工刺伤出血后到自然止痢所需的时间。出血时间的长短首要与血管壁的完整性,减少效率,血小板数量与成效,血浆中含量等有关。上述各样因素有重疾时,出血时间可知延长。方法是在动物的耳尖部剪毛消毒后,用细针头刺入3~4分米,血液即自动流出,每隔半分钟,用滤纸摄取血滴1次,如此,则纸上血迹逐步压缩,出血停止时则不再留有血迹。计算血液流出到血渍消失之间的日子,即为出血时间。本法试验的流血时间,平常马为2~3分钟。当血小板一大波压缩,肝脏受加害,红萝卜素K紧缺可使出血时间延长,动物患血斑病时,出血时间可鲜明延长到20~30分钟。

  原国家药监管理局曾于三千年1月4日印发《关于发表实施〈中夏族民共和国生物制品规程〉两千年版的关照》(国药管注〔3000〕337号)规定,收载于《中华夏族民共和国海洋生物制品规程》三千年版暂行规程的类型,须在八年内(至二零零四年九月二二十七日)完成相应的成色调控规范、检定方法及临床医疗效果的评价等专门的职业。甘休2004年5月16日,原收载于暂行规程的人凝血酶原复合物、组织胺人免疫球蛋白、注射用抗乙型胆汁返流性胃炎转移因子和金葡素注射液等4个档案的次序已做到了连带的立异专门的学问,经中夏族民共和国生物制品标准化委员会相关标准委员会讨论通过,现予宣布(见附件),并就关于规程转正布告如下:

  一、甘休使用出血时间测定项指标Duke法,但出血时间的查实项目不吐弃。若临床困惑血管壁至极所致出血性病痛时(如血管性血友病、单纯性紫癜、过敏性紫癜等),可利用出血时间测定器法检测出血时间。

活化部分凝血活酶时间测定。组织凝血活酶是脂蛋白,用于测定凝血酶原时间,这种全部的脂蛋白称为完全凝血活酶。用氯仿或乙醚自完全凝血活酶中浸建议来的物质则称为部分凝血活酶,其参预Ⅸa和Ⅹa的凝血功用。该考试是在血浆巾参预APTT试剂(接触因子激活物和卵磷脂)和钙离子后,旁观其凝血时间。如以白陶土为接触因子激活物,也可称为白陶土部分凝血活酶时间。本试验是内源性凝血机能的综合性检查。

  一、上述4个类型转正规程自2001年一月1日起正式执行。自举办之日起,原不常规程予以废止。

  二、停止使用凝血时间测定玻片法和毛细血管法,用活化部分凝血活酶时间(APTT)或全血凝固时间(CT,试管法)测定实行替代。

治病理检查查时,应与常规动物实行相比较试验,剖断在延长期10秒以上为非常(www.nczfj.com)。APTT延长重要见于严重的肝脏病痛、矿物质K缺少、DIC等。血浆凝血酶原时间测定,平日堪当凝血酶原时间测定。在被检血浆中投入钙离子和第Ⅲ因子,测定其凝固时间即血浆凝血酶原时间,外源性凝血系统中因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ质或量特别时影响此试验,是外源性凝血活性的综合性检查。PT减弱见于血液高凝状态如DIC前期、乙醚麻醉后等。PT延长首要见于严重的肝脏病痛、碳水化合物K缺少、DIC前期等。

  二、生产上述暂行规程转正品种的药物生产集团应遵照转正规程的要求,生产3批样品送中中原人民共和国药品生物制品检定所扩充质量复核,并遵从《药品注册管理方法(实践)》的相干规定制订注册规范,以补充申请方式报作者局审查批准。

  三、截止使用经常内科手术前的正规出血时间检查测量检验,用活化部分凝血活酶时间(APTT)、血浆凝血酶原时间(PT)和血小板计数(PLT)联合检查测验替代,如医治有出血史时另加出血时间测定器法进行出血时间检查实验。

3 抗凝作用检查

  三、请外地、自治区、直辖市食物药监管理单位各负其责通知辖区内有关药物生产合作社。

  请将以上须要马上布告到各级种种医治机构。在施行进度中,有准绳的医治机构要尽早达到上述要求。条件尚不具备的,必须在2002年3月31方今完成供给。

凝血酶凝固时间测定。在被检血浆中加入正规凝血酶溶液,测定其凝固时间即凝血酶凝固时间。当纤维蛋白原鲜明减小或有结构极度,或血循环中有抗凝血物质时,该考试时间延长。其临床意义主要见于循环血液中AT-Ⅲ活性显著增进,严重肝脏病痛、过敏性休克及产生DIC时。

  四、对有的时候规程中绝非得到批准转正的其余类其他管理意见,我局将另行公告。

  附件:

抗凝血酶-Ⅲ测定。常用的法子有凝血法、免疫学检查法、酶学测定法等。凝血法,将除了纤维蛋白原的被检血浆和个别的凝血酶互相反应后,凝血酶的一有的被检标本中的AT-Ⅲ如月而错过活性,再出席纤维蛋白原溶液测定其凝固时间,此时间决计于剩余凝血酶的含量。免疫性学检查法,有AT-Ⅲ抗体实行单相免疫性扩散、胶乳凝集、火箭电泳、激光散射测浊或近红外比浊等措施加以测定,得出AT-Ⅲ的抗原含量。酶学测定法,在标本中步入一定量的肝素,造成AT-Ⅲ肝素复合物,此复合物即火速地和凝血酶结合成为AT-Ⅲ肝素凝血酶复合物,被整合的凝血酶即失去活性,再参与对凝血酶特异性非常高的产色肽合成基质,以测定剩余凝血酶的活性,由此测度AT-Ⅲ的抗凝血酶活性。

  附属类小部件:1.人凝血酶原复合物创造及核实规程

出、凝血时间检查方法操作规程

  2.团体胺人免疫性球蛋白创设及核准规程

  (二〇〇三年七月十五日卫生部办公厅改正)

  3.注射用抗乙型胆总管结石转移因子创设及核算规程

  全文

  4.金葡素注射液创建及核准规程

  一、出血时间(测定器法)

  国家食物药监管理局
  二○○两年4月十五日

  (一)器材

  附属类小部件1:人凝血酶原复合物创建及核查规程

  1.血压计

  RequirementsforProthrombinComplex

  2.出血时间测定器:为双刀片弹簧装置,两把刀子每片长均为6mm,深为1mm.

  本品系由健康人的血浆,经低温乙醛蛋白分离法或经国家药物监督管理单位认同的其它措施提制,并经病毒灭活管理而得的冻干制剂,内含凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ及适当牢固剂。不含防腐剂和抗生素。

  3.干净滤纸

  1 骨干要求

  4.秒表

  1.1.1 设施与生产品质管理

  (二)操作

  按中夏族民共和国《药品生产品质管理专门的学业》须求进行。厂房设备必得专项使用,不得与其余异种蛋白制剂混用。

  1.血压计袖带缚于上臂,加压。中年人维持在5.3kpa(40mmHg),小孩子保险在2.6kpa(20mmHg)处。

  1.1.2 原料及辅料

  2.在肘前窝凹下二横指处常规消毒,轻轻绷紧皮肤,避开血管、疤痕、肺痈,置出血时间测定器使它贴于皮肤表面,注意刀片的长度与前臂相平行,按其开关,使刀片由“测定器”内刺入皮肤,运行秒表。

  生产中所用的稀释剂、稳固剂、防腐剂、灭活剂、佐剂,及别的化学工业原料,其品质应顺应现行反革命《中中原人民共和国药典》或《中华夏族民共和国生物制品首要原料辅料材料质量控制规范》的需求。

  3.每隔半分钟,用干净滤纸吸收流出血液,直至出血自然终止,按停秒表计时。

  辅料品种与用量应当无毒,不影响产品的安全性和卓有效率,并应对明确的查验方法无烦懑。

  (三)参考值:6.88±2.08min

  化工及食物原材料作为原质地时,必得制订符合药用须求的正规化,并需经国家药物监督管理机构许可。

  二、全血凝固时间测定(CT,试管法)

  1.1.3 生产用水

  (一)原理

  生产用基本水应符合饮用水标准,纯化水、注射用水及灭菌注射用水应顺应现行反革命《中华夏族民共和国药典》标准。

  静脉血离体后至完全凝固所需的时日,它是展现内源系统凝血活性的筛选试验。

  1.1.4 生产用器械

  (二)操作

  直接用来生产的五金或玻璃等器械,必需专项使用,并透过严俊清洗及去热原质管理或灭菌处理。

  1.取内径为8mm小规模试制管3支,编号1、2、3.

  2 制造

  2.正中下怀地收取待测者静脉血3ml,自血流入针头初始计时,去针头后沿管壁每管缓慢注入血液1.0ml,置37℃水浴中。

  2.1 原料血浆

  3.3min后,每隔半分钟将首先管倾斜1次,直至将试管倒置血液不流动停止;再相继旁观第二管,第二管凝固后,再观察第三管。以第三管凝固时间为凝血时间。

  2.1.1 血浆的来源、采撷及品质应切合本版规程通用准则《原料血浆收集规程》供给。血浆应无凝块,无纤维蛋白析出,非脂血,无溶血。

  (三)参考值:4~12min

  2.1.2 去除冷沉淀、凝血因子Ⅷ的血浆及组分Ⅲ沉淀均可用以生产。

  三、活化部分凝血活酶时间测定(APTT)

  2.1.3 组分Ⅲ沉淀寄放于-30℃以下,保存时间不足当先3个月。

  (一)原理

  2.2 原液制备

  在37℃下以白陶土激活因子XII和XI,以脑磷脂质(部分凝血活酶)代替血小

  2.2.1 可使用直接从血浆中用凝胶吸附法或低温二甲醚和聚乙二醇分离蛋白并经凝胶吸附法制备,亦可用经国家药物监督管理部门获准的别样艺术制备。生产进度中无法加别的防霉剂或抗生素。

  2+板提供凝血的催化表面,在Ca  参预下,观望乏血小板血浆凝固所需时间。是内源凝血系统较敏感和常用的筛选试验。

  2.2.2 果胶透析和抽水,应选择超滤法。澄清及除菌过滤,应选取无石棉的介质。

  (二)试剂

  2.2.3 原液检定

  1.待测血浆及平常对照血浆:以109mmol/L枸橼酸钠溶液作1∶9抗凝,2000r/min离心10min,获乏血小板血浆。应利用塑料试管,幸免血小板激活。

  按3.1项进行。

  2.40g/L白陶土-甘油脑磷脂的混悬液。

  2.3 半成品制备

  3.0.025mol/L正丁腈溶液。

  2.3.1 配制

  (三)操作

  按产品规格配制,制品内可加适宜的稳固剂。若加肝素,则每1.0IU因子Ⅸ肝素加量不超过0.5IU.

  1.取待测血浆、白陶土-甘油磷脂的混悬液各0.1ml,混匀,置37℃水浴温育3min,其间轻轻摇拽多次。

  2.3.2 半成品检定

  2.加盟经预温至37℃的0.025mol/L氯化亚铁溶液0.1ml,马上拉开秒表,置水浴中不断振摇,约30s时收取试管,观看出现细小蛋白丝的日子,重复三次取平均值。

  按3.2项进行。

  3.还要按上法测定符合规律对照。

  2.4 成品制备

  (四)参考值:男性31.5-43.5s,女人32-43s.待测者的测定值较平常对照值延长超越10s以上才有病理意义。

  2.4.1 分批

  四、血浆凝血酶原时间测定(PT,-期法)

  应顺应本版规程通则《生物制品分批规程》的关于规定。

  (一)原理

  2.4.2 分装及冻干

  2+

  按本版规程通用准则《生物制品分装规程》实行。除菌过滤分装的成品应立时冻结。冻干进度制品温度不可超过35℃,真空封口。

  在待检血浆中出席过量的集体凝血活酶浸出液和Ca  ,使凝血酶原调换为凝血酶,前面一个使纤维蛋白原调换为纤维蛋白。它不只反映凝血酶原水平,也是反映因子V、VII、X和微小蛋白原在血浆中的水平,故是外源性凝血系统的筛选试验。

  2.4.3 规格

  (二)器具和试剂

  每瓶人凝血因子Ⅸ的效价可分为100、200、300、400、1000IU5种,同不日常候制品还包涵人凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ。

  1.团伙凝血活酶浸出液:常用人或兔脑粉浸出液;

  2.4.4 包装

  2.0.025mol/L氯化锂溶液;

  应切合本版规程通用准则《生物制品包装规程》的有关规定。

  3.秒表、塑料试管、塑料注射器。

  2.5 病毒去除和灭活

  (三)操作

  生产进度中应该一定的删除和灭活脂包膜和非脂包膜病毒处理。若是应用灭活剂(如有机溶剂、去污剂)灭活病毒,则应规定人用安全的灭活剂残留量最高限值。

  1.在试管内投入109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml,然后参与待检者血(或正规对照)1.8ml,混匀,高速离心,分离血浆。

  3 检定

  2.取小试管1支,参加待测血浆和团协会凝血活酶浸出液各0.1ml,37℃预温,再参加0.025mol/L氢氰酸溶液0.1ml(氯化氰液也应预温在37℃水浴中),马上张开秒表,不断轻轻倾斜试管,记录至液体结束流动所急需的年华。重复以上操作2-3次,取平均值,即为凝血酶原时间。

  3.1 原液检定

  3.况兼按上法测定符合规律对照。

  3.1.1 pH值

  (四)计算

  按3.3.3.2项进行。

  由于区别来源、分化制备方法的团伙凝血活酶对结果影响异常的大,造成结果可比性非常不好,特别影响推断医疗成效。WHO提议以人脑凝血活酶67/40批号作为标准品,并以国际敏感度指数(international sensitivity index,ISI)表示种种制剂与67/40之内互相关系。67/40为本来参谋品,定ISI为1.0.于是各个制剂必得标以ISI值。国外现在选用国际准则(凝血酶原时间)比值(international normalize-dratio,INMurano)统一判别医治效果,以INLacrosse调节在2-4时为抗凝医治适当范围。为

  3.1.2 活性测定

  ISI此必需通过该团队凝血活酶的ISI,经下列公式总计:INCR-V=PTGL450   PT路虎极光:凝血酶原时间比值。

  3.1.2.1 人凝血因子Ⅸ活性及比活性

  备注:PT、APTT的仪器测定操作方法依据仪器、试剂表达书的供给开展。

  每1ml人凝血因子Ⅸ效价应不低于10IU(附录1),比活性应相当大于0.3IU/mg蛋白。

  3.2 半成品检定

  3.2.1 热原质试验

  按本版规程通用准则《生物制品热原质试验规程》举办。注射剂量按家兔体重每1kg注射30IU人凝血因子Ⅸ,应相符规定。

  3.2.2 无菌试验

  按本版规程通则《生物制品无菌试验规程》A项进行,切合规定。

  3.3 成品检定

  每批产品应抽样作周密品质把关,差异机柜冻干的成品分别抽样做无菌试验和水分测定。以下检定项目除真空度、溶解时间、水极度,其他类型按产品标示量参与灭菌注射用水溶化后展开核实。

  3.3.1 鉴定分别试验

  按《中中原人民共和国海洋生物制品规程》二零零二年补充本《血液制品鉴定识别试验》A法开展。仅与抗人的血清产生沉淀线,与抗马、抗牛、抗猪、抗羊血清不发出沉淀线。

  3.3.2 物理检查

  3.3.2.1 外观

  应为铁黄或金藏蓝疏松体,复溶后应该为无色、淡中黑色、淡花青或紫紫褐色澄明溶液,不该异物或沉淀。

  3.3.2.2 真空度

  以高频火花真空测定器检查实验,瓶内应出现蓝黄色辉光。

  3.3.2.3 溶解时间

  向已平衡至20~25℃的制品,参预标示量的20~25℃灭菌注射用水,轻轻摆动,应于15秒钟内完全溶解。

  3.3.3 化学检定

  按本版规程附录《生物制品化学及其他检定方法》实行。

  3.3.3.1 水分

  应不超过3.0%.

  3.3.3.2 pH值

  在20℃±2℃测定,pH值为6.5~7.5.

  3.3.3.3 PEG含量

  应不超越0.5g/L.

  3.3.3.4 钠离子含量

  应不高于160mmol/L.

  3.3.3.5 枸橼酸离子含量

  应不超越25mmol/L.

  3.3.4 效价测定

  3.3.4.1 人凝血因子Ⅸ

  3.3.4.1.1 效价

  按附录1法测定,凝血因子Ⅸ活性应十分大于10IU.按3.3.2.3项到场的溶剂量,总结每瓶人凝血因子Ⅸ效价,应该为标示量的九成~1百分之六十.

  3.3.4.1.2 比活性

  应十分大于0.3IU/mg矿物质。

  3.3.4.2 人凝血因子Ⅱ效价

  按3.3.2.3项步向的溶剂量及每1ml人凝血因子Ⅱ活性(附录2),计算每瓶人凝血因子Ⅱ效价,应十分的大于标示量的八成.

  3.3.4.3 人凝血因子Ⅶ效价

  按3.3.2.3项加入的溶剂量及每1ml人凝血因子Ⅶ活性(附录3),总结每瓶人凝血因子Ⅶ效价,应不低于标示量的五分四.

  3.3.4.4 人凝血因子Ⅹ效价

  按3.3.2.3项参与的溶剂量及每1ml人凝血因子Ⅹ活性(附录4),总括每瓶人凝血因子Ⅹ效价,应不低于标示量的五分四.

  3.3.5 人凝血酶活性

  按附录5办法测定。不得有凝块或比十分的小蛋白析出。

  3.3.6 肝素含量

  按附录6法测定,每1IU人凝血因子Ⅸ肝素含量应不高出0.5IU.

  3.3.7 活化的凝血因子

  按附录7形式测定,凝固时间应不低于150秒。

  3.3.8无菌检查

  按本版规程通用准则《生物制品无菌试验规程》A项进行,切合规定。

  3.3.9 至极毒性检查

  按本版规程通则《生物制品十分毒性试验规程》进行。豚鼠每只注射供试品5ml(每1ml含10IU人凝血因子Ⅸ),小鼠每只注射供试品0.5ml(每1ml含10IU人凝血因子Ⅸ),应切合规定。

  3.3.10 热原质量检验查

  按本版规程通用准则《生物制品热原质试验规程》实行。注射剂量按家兔体重每1kg注射30IU人凝血因子Ⅸ,应切合规定。

  3.3.11 HBsAg

  按试剂盒表明书测定,应该为中性(neuter gender)。

  3.3.12 依照病毒灭活方法,应扩大对应的检定项目。若使用磷酸三丁酯和Twain-80法灭活病毒,则应检查评定磷酸三丁酯和Twain-80残留量。

  3.3.12.1 磷酸三丁酯残留量

  应不高于10μg/ml.

  3.3.12.2 吐温-80残留量

  应不抢先100μg/ml.

  4 保存、运输及保质期

  应在2~8℃避光保存和平运动输。保藏期自分装之日起,按国家药监管理机构许可的实行。

  5 施用表明

  根据国家药监处理部门获准的源委及本版规程通用准则《生物制品包装规程》编写。

  6 附录

  附录1 人凝血因子Ⅸ效价测定法(一期法)

  附录2 人凝血因子Ⅱ效价测定法(一期法)

  附录3 人凝血因子Ⅶ活性测定法(一期法)

  附录4 人凝血因子X效价测定法(一期法)

  附录5 人凝血酶活性测定法

  附录6 肝素含量测定法(凝固法)

  附录7 活化的凝血因子活性测定法

  附录1 人凝血因子Ⅸ效价测定法(一期法)

  本法用人凝血因子Ⅸ缺少血浆作为基质血浆,选拔一期法测定供试品人凝血因子Ⅸ效价。

  1 试剂

  1.1 3.8%柠檬酸三钠溶液

  称取无水柠檬酸三钠9.5g,加水溶解并稀释至250ml.

  1.2 咪唑缓冲液

  称咪唑0.68g和阵雪1.17g溶于100ml水中,参预0.1mol/L烟酸42.2ml,然后补加水至200ml,pH为7.3.

  1.3 稀释液

  取1体量的3.8%柠檬酸三钠加入5容量咪唑缓冲液混合,加人血白蛋白至终浓度为1%.

  1.4 激活的片段凝血活酶(APTT)试剂

  1.5 人凝血因子Ⅸ贫乏血浆

  为人凝血因子Ⅸ含量稍低于1%的乙型血友病人伤者血浆或人工基质血浆。

  1.6 0.05mol/L氯化物溶液

  称氯化钠(CaCl2.2H2O)147g,加水溶解并稀释至一千ml,配制作而成1mol/L氯化铁寄放液,用前用水稀释20倍,配成0.05mol/L丙烯腈溶液。

  2 人凝血因子Ⅸ规范溶液的配制

  用人凝血因子Ⅷ缺少血浆将人凝血因子Ⅸ标准品稀释成1IU/ml,再用稀释液分别张开10倍、20倍、40倍和80倍稀释,置冰浴待用。

  3 供试品溶液的配制

  若供试品中带有肝素,先用硫酸鱼精蛋白花潮供试品中的肝素。测定时先用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆稀释成约1IU/ml,再用稀释液实行10倍和20倍或40倍稀释,置冰浴待用。

  4 测定法

  取APTT试剂0.1ml,置37℃保温一定时间(平日4分钟),加人凝血因子Ⅸ缺乏血浆0.1ml、供试品溶液0.1ml,混匀,置37℃保温一定时期(日常5分钟),加已预热至37℃0.05mol/L氯化氰溶液0.1ml,记录凝固时间。

  用分裂稀释度的人凝血因子Ⅸ标准溶液0.1ml代替供试品溶液,同法操作。

  5 结果总括

  将标准溶液中人凝血因子Ⅸ活性(IU/ml)对其相应的凝固时间(秒)实行双对数直线回归管理,求出直线回归方程。将供试品溶液的凝固时间(秒)对数值代入方程,求得的值的反对数,再乘以稀释倍数,即为每1ml供试品溶液中人凝血因子Ⅸ效价(IU/ml),取供试品各稀释度的人凝血因子Ⅸ效价均值即为供试品中人凝血因子Ⅸ效价(IU/ml)。

  「附注」

  (1)直线回归相关全面应不低于0.98.

  (2)测定期,须要各类稀释度平行测定2管,两管之差不得赶过均值十分之一,不然重测。

  (3)直接与标准品、供试品和血浆接触的容器应该为塑料或硅化制品。

  (4)规范品和供试品稀释后,应置冰浴待用。

  (5)选拔电动凝血仪时,则按仪器使用表达实行。

  附录2 人凝血因子Ⅱ效价测定法(一期法)

  本法用人凝血因子II紧缺血浆作为基质血浆,采取一期法测定供试品中人凝血因子II效价。

  1 试剂

  1.1 稀释液

  称取巴比妥钠11.75g、生理盐水14.67g溶于1570ml水中,用1mol/L乙酰胆碱调pH至7.3,再加水至3000ml.用前加人血白蛋白至终浓度为1%.

  1.2 含钙促凝血酶原激酶(Thromboplastin)

  1.3 人凝血因子II紧缺血浆

  人凝血因子II含量紧跟于1%的患儿血浆或人工基质血浆。

  2 人凝血因子Ⅱ标准溶液的配制

  用人凝血因子Ⅱ缺乏血浆将人凝血因子Ⅱ规范品稀释成1IU/ml,再用稀释液分别开展10倍、20倍、40倍和80倍稀释,置冰浴备用。

  3 供试品溶液的配制

  用人凝血因子Ⅱ缺少血浆将供试品稀释成约1IU/ml,再用稀释液进行10倍和20倍或40倍稀释,置冰浴待用。

  4 测定法

  取供试品溶液0.1ml,加人凝血因子Ⅱ缺少血浆0.1ml,混匀,置37℃水浴保温一定时期(经常3秒钟),然后走入已预热至37℃含钙促凝血酶原激酶溶液0.2ml,记录凝固时间。

  用分裂稀释度的人凝血因子Ⅱ标准溶液0.1ml代替供试品溶液,同法操作。

  5 结果总括

  将规范溶液人凝血因子Ⅱ活性(IU/ml)对其对应的凝固时间(秒)举行双对数直线回归管理,求出直线回归方程。将供试品溶液的凝固时间(秒)对数值代入方程,求得的值的反对数,即为供试品人凝血因子Ⅱ效价,再乘以稀释倍数,即为每1ml供试品溶液人凝血因子Ⅱ效价(IU/ml),取供试品各稀释度的人凝血因子Ⅱ效价均值即为供试品人凝血因子Ⅱ效价(IU/ml)。

  「附注」

  (1)直线回归相关周到应十分的大于0.98.

  (2)测定期供给各样稀释度平行测定2管,两管之差不得抢先均值一成,不然重测。

  (3)直接与标准品、供试品和血浆接触的器皿应该为塑料或硅化制品。

  (4)规范品和供试品稀释后,应置冰浴待用。

  (5)选拔电动凝血仪时,则按仪器使用表达书实行。

  附录3 人凝血因子Ⅶ效价测定法(一期法)

  本法用人凝血因子Ⅶ缺少血浆作为基质血浆,选取一期法测定供试品人凝血因子Ⅶ效价。

  1 试剂

  1.1 稀释液

  称取巴比妥钠11.75g、生理盐水14.67g溶于1570ml水中,用1mol/L烟酸调pH至7.3,再加水至3000ml.用前加人血白蛋白至终浓度为1%.

  1.2 含钙促凝血酶原激酶(Thromboplastin)

  1.3 人凝血因子Ⅶ缺少血浆

  人凝血因子Ⅶ含量紧跟于1%的病人血浆或人工基质血浆。

  人凝血因子Ⅶ标准溶液的配制

  用人凝血因子Ⅶ缺少血浆将人凝血因子Ⅶ标准品稀释成1IU/ml,再用稀释液分别开展10倍、20倍、40倍和80倍稀释,置冰浴备用。

  2 供试品溶液的配制

  用人凝血因子Ⅶ贫乏血浆将供试品稀释成约1IU/ml,再用稀释液举办10倍和20倍或40倍稀释,置冰浴待用。

  3 测定法

  取供试品溶液0.1ml,加人凝血因子Ⅶ缺乏血浆0.1ml,混匀,置37℃水浴保温一按期间(平日3分钟),然后参与已预热至37℃含钙促凝血酶原激酶溶液0.2ml,记录凝固时间。

  用不一样稀释度的人凝血因子Ⅶ标准溶液0.1ml替代供试品溶液,同法操作。

  4 结果总结

  将规范溶液人凝血因子Ⅶ效价(IU/ml)对其对应的凝固时间(秒)举办双对数直线回归处理,求出直线回归方程。将供试品溶液的凝固时间(秒)对数值代入方程,求得的值的反对数,再乘以稀释倍数,即为每1ml供试品溶液人凝血因子Ⅶ效价(IU/ml),取供试品各稀释度的人凝血因子Ⅶ效价均值即为供试品人凝血因子Ⅶ效价(IU/ml)。

  「附注」

  (1)直线回归相关周全应异常的大于0.98.

  (2)测定时供给各样稀释度平行测定2管,两管之差不得超过均值一成,不然重测。

  (3)间接与标准品、供试品和血浆接触的容器应该为塑料或硅化制品。

  (4)标准品和供试品稀释后,应置冰浴待用。

  (5)采取电动凝血仪时,则按仪器使用表达书举行。

  附录4 人凝血因子X效价测定法(一期法)

  本法用人凝血因子Ⅹ缺少血浆作为基质血浆,采纳一期法测定供试品人凝血因子Ⅹ效价。

  1 试剂

  1.1 稀释液

  称取巴比妥钠11.75g、生理盐水14.67g溶于1570ml水中,用1mol/L泛酸调pH至7.3,再加水至2000ml.用前加人血白蛋白至终浓度为1%.

  1.2 含钙促凝血酶原激酶(Thromboplastin)

  1.3 人凝血因子Ⅹ缺少血浆

  人凝血因子Ⅹ含量低于1%的患儿血浆或人工基质血浆。

  2 人凝血因子Ⅹ规范溶液的配制

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